هضم سریع DNA 5-15 دقیقه آنزیم BsaI بیوشیمیایی معرف CE تایید شده

آنزیم BsaI

آنزیم ها مجموعه ای از آنزیم های محدود کننده مهندسی شده برای هضم سریع DNA در 5-15 دقیقه هستند.از آنزیم ها می توان برای هضم پلاسمید، DNA ژنومی و ویروسی و همچنین محصولات PCR استفاده کرد.همه آنزیم ها فعالیت برتر را در بافر جهانی نشان می دهند، بنابراین سیستم واکنش هضم آنزیمی ساده شده است.علاوه بر این، آنزیم‌ها افزونگی آنزیمی بسیار خوبی را فراهم می‌کنند و اجازه هضم آسان بسترهای اضافی یا قالب‌های دشوار را می‌دهند.

حمل و نقل و ذخیره سازی

قطعات همراه با بسته یخ ارسال می شوند و می توانند در دمای -20 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال نگهداری شوند.

سایت برش

5'-GGTCTC(N)1↓-3'

3'-CCAGAG(N)5↑-5'

شرایط واکنش توصیه شده

1× FuniCut™ بافر؛در دمای 37 درجه انکوبه کنید.

غیر فعال سازی حرارتی

انکوباسیون در دمای 80 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه.

کنترل کیفیت

1. تعریف فعالیت:1 میکروگرم DNA pPIC9K به طور کامل با 1 میکرولیتر از آنزیم در 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد در حجم کل واکنش 20 میکرولیتر هضم شد.

2. سنجش فعالیت طولانی مدت انکوباسیون/ستاره:بدون تخریب قابل تشخیص 1 میکروگرم pPIC9K DNA به دلیل آلودگی نوکلئاز یا فعالیت ستاره در طول انکوباسیون با 1 میکرولیتر FuniCut™ BsaI به مدت 3 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد رخ داد.انکوباسیون طولانی تر ممکن است منجر به فعالیت ستاره شود.

3. روش بستن و بازیابی (L/R):پس از هضم با 1μL آنزیم در شرایط بهینه، محصول بازیافتی حاصل از هضم را می توان تحت T4 DNA Ligase در دمای 22 درجه سانتیگراد متصل کرد.محصول بستن را می توان توسط آنزیم جدا کرد.

4. فعالیت اندونوکلئاز غیر اختصاصی:انکوباسیون 1 میکرولیتر آنزیم با 1 میکروگرم DNA پلاسمید سوپرپیچ شده به مدت 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تغییری در شرایط سوپرپیچ شده نشد.

دستورالعمل ها

1. پروتکل برای هضم سریع DNA های مختلف

1.1 اجزای واکنش زیر را به ترتیب مشخص شده روی یخ ترکیب کنید:

[توجه]: *برای محصولات PCR خالص شده.مبلغ 10×بافر FuniCut™ممکن است به دلیل قدرت یونی باقیمانده در محصولات PCR خالص نشده به 2 میکرولیتر کاهش یابد.هنگامی که محصول PCR برای شبیه سازی استفاده می شود، توصیه می شود که محصول PCR قبل از هضم خالص شود.

1.2 به آرامی مخلوط کنید (وورکس نکنید) و به سمت پایین بچرخانید.

1.3 در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه (DNA پلاسمید) یا 15-30 دقیقه (محصول PCR) یا 30-60 دقیقه (DNA ژنومی) انکوبه کنید.

1.4 اختیاری: آنزیم را با حرارت دادن به مدت 20 دقیقه در دمای 80 درجه سانتیگراد غیرفعال کنید.

2. هضم مضاعف و چندگانه DNA

2.1 از 1 میکرولیتر از هر آنزیم استفاده کنید و شرایط واکنش را به طور مناسب افزایش دهید.

2.2 حجم ترکیبی آنزیم ها در مخلوط واکنش نباید از 10/1 حجم کل واکنش تجاوز کند.

2.3 اگر آنزیم ها به دمای واکنش متفاوتی نیاز دارند، با آنزیمی که به دمای کمتری نیاز دارد شروع کنید، سپس آنزیم دوم را اضافه کنید و در دمای بالاتر انکوبه کنید.

3. افزایش مقیاس واکنش هضم DNA پلاسمید

[توجه داشته باشید]: جوجه کشی در ترموستات آب، ترموستات فلزی یا ترموستات شنی.اگر حجم کل واکنش از 20 میکرولیتر بیشتر شود، زمان انکوباسیون را افزایش دهید.

تعداد مکان های شناسایی در DNA